靶向捕获高通量测序

怎样通过血球计数板进行质检操作呢？将血球计数板擦拭干净，取干净的盖玻片盖在计数板上；将细胞悬液混匀（或10µl台盼蓝+10µl细胞悬液），吸出10µl悬液至计数板上盖玻片的一侧使细胞核悬液铺满盖玻片和计数板之间；在显微镜下分别对V1/V2/V3/V4四个计数区域进行计数；按细胞计数公式进行计算，计算公式：细胞总数={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*悬液体积*稀释倍数，V1/V2/V3/V4为各个计数区的细胞数目，细胞活率=活细胞数目/总细胞数目*100%。特别申明：不能采用过柱离心的方法提取总RNA。靶向捕获高通量测序

RNA样品：1.请务必提供每个样品具体的浓度、体积、制备时间以及物种来源。比较好附上电泳胶图或者 Agilent Bioanalyzer 仪器检测数据等；2.对于普通转录组样品，请提供浓度≥100 ng/µl、总量≥2 µg 的总 RNA 样品，样品请去蛋白并进行 DNase处理；一般情况下，普通转录组测序需要 RNA 样品的 OD260/OD280为 2.0~2.2，Agilent Bioanalyzer 2100 器检测获得的总RNA 28S:18S≥1，RIN≥8；对于全长转录组测序样品（ISO-seq）,请提供浓度大于200 ng/ul，总量大于5 μg的总RNA样品。样品请去蛋白并进行 DNase 处理；全长转录组测序需要 RNA 样品的 OD260/OD280 为 2.0~2.2，2.3Agilent Bioanalyzer 2100 器检测获得的总RNA 28S:18S≥1，RIN≥8.5；上海small RNA高通量测序平台近年来，随着高通量测序技术的发展和普及，单细胞测序技术发展十分迅速。

台盼蓝染色原理：台盼蓝染色原理：台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高，可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。

通过显微镜使用血球计数板质检得到质检结果：明场（细胞未染色）：主要可以观察悬液背景质量（背景干净，无杂质碎片，无细胞团块）；台盼蓝场（细胞与台盼蓝染色后）：主要可以观察活性（主要为活细胞，未染色蓝色的为活细胞）；通过台盼蓝场计算活率：90%>80%；细胞浓度:710cells/µl;等结果来看，血球计数板质检结果的展示可以看出所有指标均符合上机标准，属于高质量单细胞悬液。

生工其他PCR产物测序，项目介绍：随着基因编辑技术（尤其是CRISPR-cas9技术）的发展，科研人员使用传统的Sanger测序无法快速有效鉴定基因编辑效率。但是，通过对靶基因区域附近设计引物，进行PCR扩增，并对PCR产物进行高通量测序，可以快速高效的获得目标区域的突变频率信息，尤其是对低频突变的检测效果远远优于一代测序，性价比极高。总DNA 或者包装完好的原始样品（如土壤、粪便、 水体和口腔物）；样品名称清晰，冷藏运输。如有对照与实验样品的区分，标明正常样品与实验样品，如有分组，详细描述分组分析信息，以及分组比较的分析需求信息。单细胞测序到底是什么？

单细胞测序技术的应用：单细胞测序技术可以检测复杂组织中单个细胞不同的生物学特性，这可以极大的帮助我们进一步了解细胞与细胞之间的差异。"这几乎就像通过几颗星星看到了整个宇宙。"哈佛大学分子和细胞生物学教授 Alexander Schier的这句话应用在这里也是很合适了。这幅图正是来自于在2018年4月 Science 杂志发表的三篇[8-10]来自哈佛医学院和哈佛大学的研究人员关于单细胞基因测序文章中的一幅结果图，Alexander Schier教授也是其中一篇文章的作者。这几篇文章使用多种检测技术组合，其中包括对数千个发育中的斑马鱼和青蛙胚胎单细胞测序，在胚胎发育建议初的24小时内追踪单个细胞的发育情况，可以揭示出胚胎细胞何时何地转变为新的细胞状态和类型并向我们展示了组织和整个机体从单细胞发育的完整历程。单细胞转录组测序指在单细胞水平上对 mRNA 进行高通量测序和分析的技术。上海地区small RNA高通量测序服务

请注意选择无RNA酶的容器盛放样本，尽量避免RNA降解。靶向捕获高通量测序

2021年11月1日，在这个平凡而又特殊的日子里，生工生物高通量测序部迎来了一位新成员——10xGenomics Chromium X！不要看我们个头小，我们可是百万级单细胞捕获神器吆。X是如何实现单次运行有这么高的吞吐量呢？多通道+高捕获+10x的CellPlex多样本混样技术。X仪器本身有16个通道（Controller为8通道），每个通道比较多捕获20000个细胞（Controller为10000个细胞）。再结合10x的CellPlex多样本混样技术，每个通道比较多可捕获60,000个细胞，去除双细胞率后，每张芯片比较多可捕获750,000个单细胞。靶向捕获高通量测序

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